石蜡切片包埋失误怎么挽救,石蜡切片的原理和基本步骤？
一次法蜡型包埋的步骤和操作要点？
包埋步骤
1组织脱水、渗透与包埋
○1脱水：
50% 乙醇（90min）→70% 乙醇（90min）→85%乙醇(90min) →95%乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)。
注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）
○2脱水的体积至少为组织提及的4倍
○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬
○4最好能搅拌，使脱水充分
○2透明：
1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步60min。
注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。
○3渗透：
1/2二甲苯＋1/2石蜡(90min)→石蜡I (120min)→石蜡II(120min),62℃。
注：若出现从脱水到渗透时间太长，可在1/2二甲苯＋1/2石蜡或石蜡I的步骤停下,即将进入1/2二甲苯＋1/2石或石蜡I后，立即冷却，将组织封进里面，到第二天复融；第二天融解时温度不能超过65℃，并且需到完全溶解时开始进入步骤算时间。
○4包埋：
将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。
注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。
2 切片和贴片
将包埋好的组织块于切片机中约5μm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。
石蜡切片的原理和基本步骤？
1. 固定：
将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2.脱水：頭條萊垍
为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3.透明：
常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。材料块在透明剂浸渍过程称透明。
4.浸蜡：頭條萊垍
先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5.包埋：
以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6.切片：
切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。通常切片厚度为3-5um，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7.贴片与烤片：
一般使用恒温水浴锅，温度控制在37-40℃左右，有利于石蜡切片的展开，贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋白质凝固后即可染色。頭條萊垍
8.切片脱蜡及水化：
干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
9.染色：
经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。实验操作简单。
免疫组化：指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应。
石蜡切片的制作步骤（附图）？
1、取材
确定所取材料的来源及部位，纵切还是横切；取材要迅速，防止阻止发生进一步变化，材料体积要适宜，下图为植物芽体取样实拍。
2、固定
最常用的固定液为FAA（万用固定液）。它的优点是材料固定时间不受限制，固定时间短则数小时，长则数月或数年。冲洗或漂洗：组织固定后应充分水洗，除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。下图为固定液浸泡的组织切块。
3、脱水
目的：水和透明剂不能互溶，只有脱去水分后，才能让透明剂进入。
试剂：梯度酒精溶液頭條萊垍
流程：70%—85%—95%–100%— 100% 每步1h-2h左右。
注意事项：保证脱水梯度和每一步脱水时间，水要完全脱净，但也不能过度脱水（过久使组织变脆、收缩，这个时间大家可以根据自己的实验来摸索一下，不必完全按照本操作来）。
下图为自动组织脱水机，适于大量样品组织脱水用。如果材料体积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。
4、浸蜡与包埋
目的：用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。頭條萊垍
浸蜡程序:(恒温)
（1）低温浸蜡（36℃）：接上步，在有二甲苯和材料的烧杯中逐步加碎蜡至过饱和（石蜡不能溶解），过夜12-24h。
（2）高温浸蜡（55-60℃，高于石蜡熔点3℃ ）：
将上步二甲苯与石蜡的混合液倒出，不要倒掉材料，将烧杯中加入纯石蜡，共5-24h。纯石蜡需要更换三次。
关于石蜡的选择石蜡熔点：
对于较硬的材料，用熔点较高的石蜡进行包埋；
当切片较薄时（在8μm以下），选用熔点较高的石蜡包埋；
夏季宜采用熔点较高的石蜡（56,58℃）,冬季宜选用熔点较低的石蜡（52,54℃）。
5、切片
传统的切片方法是将包埋好的蜡块用刀片修成规整的梯形，粘于小木块上，上机切片。
新型的切片方法是将包埋框（见下图）代替木块的支撑作用，上机切片。切片的厚度可以根据自己的实验要求来确定，一般在8μm-20μm范围内。（下图为传统切片机与新型自动切片机）
6、粘片与烤片
粘片：用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上，防止在后续的操作中材料脱落。在载玻片上涂抹粘片剂（甲液），再滴蒸馏水（乙液），放上蜡片，用滤纸吸取多余的水分。
烤片：将载玻片放于40℃展片台中烤干。
7、脱蜡与复水、染色
脱蜡目的：干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染液中进行染色。
复水目的：脱蜡后的材料，如果不经过复水，直接进入染色剂中，材料将会严重变形，甚至难以染色。頭條萊垍
染色目的：使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色和足够强的差异以便于观察。
总体流程：二甲苯→1/2 二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→番红（4h以上）→95％酒精→固绿（迅速）→95％酒精（迅速）→100%酒精→1/2 二甲苯+1/2纯酒精→二甲苯→二甲苯，以上各级约需5～10分钟，已注明时间的除外。
染色剂：1%番红（85%酒精配制）
0.5%固绿（95%酒精配制）
8、切片脱水、透明和封固
接上步，在载玻片上滴加适量（1～2滴）中性树胶，再将洁净盖玻片倾斜放下，进行封片。切片放入42℃温箱中干燥过夜。镜检，将合格的切片贴上标签。 封固剂选择加拿大树胶（Canada balsam）或中性树胶。至此，植物组织的石蜡切片大功告成！（下图为加拿大树胶）
石蜡包埋的组织和石蜡是分离的？
不是
1.作为包埋组织使用的石蜡不仅由于气候的不同需要加以选择，而且与组织的硬度也有密切关系，过硬的组织最好用硬度较高的石蜡包埋，反之，软组织则应以硬度较低的石蜡包埋。其熔点一般要求在60℃左右。
2.包埋用石蜡加温不可过高，以保持其不凝固为度，温度过高容易将组织烫坏，使得组织变硬，变脆，并发生卷曲，收缩变形而不利于切片，甚至影响诊断。另外注意埋蜡的温度和组织本身的温度， 两者是否合适，温度不一致常可造成组织与周围石蜡脱离的现象，而达不到包埋的作用。
3.包埋用石蜡应掌握用量，以组织全部包埋完毕，石蜡也恰好用完为宜。
4.包埋应注意组织病变面放在下面，并尽可能使组织放平，在不损伤组织的情况下可用镊子轻压。
5.囊壁和消化道等组织包埋时更应注意组织方位，应将组织块直立拉平，不要卷曲。
6.相同组织如包埋于一个蜡块时，除包平外，还要注意方向的一致，以利切片。
7.多块组织和碎组织包埋于一个蜡块内时，组织的排列一定要密集靠拢，以求成直线或方块型， 这样有利于切片。
8.石蜡包埋后，不宜冷凝过慢，特别是室温较高时，石蜡凝固后应立即投人冷水中加速冷却可增 加石蜡密度，韧性和硬度。但冷凝过速也会因为内外温差过大造成蜡块裂损。
冰冻切片和石蜡切片的优缺点？
石蜡切片组织学常规制片技术中较为广的应用方法。常用于观察正常细胞组织的形态结构。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，是一种长时间显微玻片标本。
石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为长时间性显微玻片标本。
冰冻切片，优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。 缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片相比较于石蜡切片简单易行，一般进行固定脱水后，固定于包埋剂就可以在冰冻切片机进行切片。有些新鲜标本可以直接取材后，冷冻托涂包埋剂后置于冷冻托上速冻，冻好后立即切片。
 冰冻切片重要的是防止样品中冰晶的出现，一般可以通过速冻的方法使组织温度骤降，减少样品内冰晶的形成。也可以将组织置于20％～30％蔗糖溶液1～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
